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变叶木采用MS基本培养基, 附加不同浓度的蔗糖、6 - BA、 IBA、NAA、2, 4- D, 加琼脂6 g /L。培养基煮沸后调pH 5?? 8 后注入容器中, 加棉塞后高压灭菌30 min 。
初代培养基: 蔗糖为30 g /L。( 1) M S+ 6- BA0. 2 m g /L + NAA 0. 2 m g /L; ( 2) M S+ 2, 4 - D 1 mg /L + 6- BA0. 1 m g /L+ NAA0. 1 mg /L; ( 3) MS + 6- BA2 mg /L + IBA1 m g / L; ( 4) MS + 6 - BA1 m g /L + IBA0. 5 m g /L; ( 5 ) MS + 6- BA1. 5 mg /L+ IBA0. 5 m g /L; ( 6 ) MS + 6 - BA0. 5 m g /L+ IBA0. 5 m g /L。
继代培养基: 蔗糖为30 g /L。( 7) M S+ 6- BA1 m g /L+ IBA0. 2 m g /L; ( 8) M S + 6 - BA0. 5 m g /L+ IBA0. 5 mg /L; ( 9) M S+ 6- BA2 mg /L+ IBA1. 5 mg /L; ( 10) M S+ 6- BA1. 5 m g /L+ IBA0. 5 mg /L; ( 11) MS + 6- BA2. 5 m g /L+ IBA2 m g /L。
生根培养基: 蔗糖为15 g 1 L。( 12) 1 /2M S+ IBA 1. 5 m g /L; ( 13) 1 /2M S+ IBA 2 m g /L; ( 14) 1 /2M S+ IBA 3 m g / L; ( 15) 1 /2M S+ IBA4 m g /L。
培养条件
将接种了外植体的三角瓶置于光照培养室内, 室温25 ?? 左右, 光照度1 000- 2 000 lx, 每天光照时间12 h条件下 诱导愈伤组织形成。20 d后继代培养, 40 d后生根培养 。
观察记载
在组织培养的不同时期观测记录组织发育情况、幼苗 长势及生根状况。
结果与分析
培养基对变叶木愈伤组织形成的影响
在不同培养基上变叶木愈伤组织产生的 时间略有差异, 总体上在15~ 20 d 切口处均产生了愈伤组 织或不定芽。接种于处理( 2)和( 6)的外植体产生愈伤组织 最快, 能在相对短的时间内诱导出较多的愈伤组织, 并且愈 伤组织生长旺盛很快产生不定芽。其他处理在随后的3~ 4 d内也都产生了愈伤组织或不定芽, 且各处理间产生的不定 芽数量差异不显著。
不同培养基对变叶木继代培养的影响
在5种不同配比的培养基下继代培养, 幼 苗的分化结果差异很大。( 7 )和( 8) 培养基分化较好, 20 d 分化2~ 3苗, 且苗生长正常, 处理( 7) 的苗比处理( 8) 的苗 长势略好但不显著。与( 7)、( 8) 相比其他培养基条件下分 化结果很不理想, 分化苗数较低或不分化。
不同培养基对变叶木生根培养的影响
在4种不同生根培养基中生根效果有明显 的差异性, 处理( 12)的培养基生根效果最好, 随着培养基中 IBA浓度的增高生根效果逐渐变差, 在培养基1 /2MS + IBA3 m g /L中已经不能生根, 在培养基1 /2M S+ IBA4 m g /L 中也不能生根, 同时在根部产生了大量的愈伤组织。
结论与讨论
激素浓度、种类及不同的配比组合对植物外植体的诱导 及分化起着重要作用。本试验选用的6 - BA 为细胞分裂 素, NAA 和IBA 为生长素类物质, 各有其不同的作用和特 点。生长激素的添加量过低时, 愈伤组织生长缓慢; 浓度过 高时, 生长受到抑制。生长素与细胞分裂素的协同调控在组 织培养中起着重要作用, 即?? 激素杠杆??。生长素生物学效 应高于细胞分裂素时, 诱导植物组织脱分化和根原基的形 成; 细胞分裂素的效应高于生长素时, 诱导植物组织再分化 和芽原基的形成。
在本试验中初代培养最佳的配方是MS+ 6- BA 0. 5 mg /L + IBA 0. 5 m g /L, 相对低浓度的BA 和IBA 组合更有利于变 叶木愈伤组织的产生。6 - BA 具有扩大细胞, 促进细胞分 裂, 打破休眠芽, 促进侧芽萌发的作用。
变叶木继代培养时其最佳的培养基是( 7 ), 与初代培养 基不同的是适当增加了6- BA浓度同时降低了IBA 浓度, 这样更有利于细胞的分裂和芽的分化, 细胞分裂素的效应高 于生长素的效应, 但如果同时增加6 - BA 与IBA浓度, 6- BA的效应会显著降低, 导致芽不分化或分化较弱。
IBA 有利于促进形成长而细的不定根, 低浓度的IBA 作 用效果优于高浓度的。在本试验当中1/2M S+ IBA1. 5 mg / L为最佳的生根培养基配方, 随IBA浓度的增加生根的条数 和长度减少, IBA 浓度达3. 0 m g /L 时变叶木已不能生根。 因此在实际应用时一定要注意各激素的使用浓度。
